Resumo Considerando os diversos problemas tecnológicos e econômicos que os microrganismos deteriorantes acarretam aos laticínios, o objetivo deste trabalho foi quantificar aeróbios mesófilos, psicrotróficos, termodúricos e esporulados no leite cru produzido na região Norte do Paraná e verificar a capacidade proteolítica e lipolítica desses microrganismos. Foram analisadas 20 amostras de leite cru e determinadas contagens de aeróbios mesófilos, psicrotróficos, termodúricos mesófilos, termodúricos psicrotróficos e esporos aeróbios e o perfil proteolítico e lipolítico de cada grupo. A contagem média de aeróbios mesófilos foi de 1,7x106UFC/mL acima do limite estabelecido pela Instrução Normativa 76 (3,0x105UFC/mL); 55% das amostras apresentaram contagens dentro dos padrões. As contagens de psicrotróficos variaram de 1,0x102 a 9,9x106UFC/mL e em 30% das amostras esse valor foi superior ao de mesófilos. A média de termodúricos mesófilos foi de 2,4x104UFC/mL, de termodúricos psicrotróficos 1,7x102UFC/mL e de esporos aeróbios foi de 5,0x101UFC/mL. Quanto ao perfil deteriorante, todos os grupos apresentaram atividade lipolítica e proteolítica elevadas, com predomínio de bactérias lipolíticas. Os valores encontrados indicam que o manejo higiênico-sanitário inadequado durante a ordenha e o resfriamento prolongado favorece a proliferação da microbiota deteriorante, que pode promover alterações significativas na qualidade e no rendimento do leite e seus derivados, mesmo após tratamento térmico.

Abstract Considering that technological problems and economic losses are basically caused by spoilage microorganisms on dairy industry, therefore the aim of this study was to quantify the mesophilic aerobic, psychrotrophic, thermoduric and aerobic spore-forming in raw milk produced in northern Paraná and also verify the proteolytic and lipolytic capacity of these microorganisms. Twenty samples of raw milk were analyzed and were determined mesophilic aerobic, psychrotrophic, thermoduric mesophilic, psychrotrophic thermoduric and aerobicspore-forming counts and proteolytic and lipolytic capacity from each group. The average counts of aerobic mesophilic were 1,79x106CFU/mL, above the limit established to Normative Instruction 76 (3,0x105CFU/mL); 55% samples had scores within the standards. Psychrotrophic counts ranged from 1,0x102 to 9,9x106CFU/mL and in 30% samples this count was higher than mesophilic. The average mesophilic thermoduric was 2,4x104CFU/mL, psychrotrophic thermoduric was 1,7x102CFU/mL and aerobic spore-forming was 5,0x101CFU/mL. As for the spoilage profile, all groups showed higher lipase and proteolytic activity, with a predominance of lipolytic bacteria. The values found indicates the inappropriate hygienic-sanitary management during milking and maintaining molk refrigerated for long periods until pasteurize, it can favorsthe proliferation of spoilage microbiota, which can promote significant changes in the quality and yield of milk and dairy products, even after the heat treatment.

RESUMO: O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX. Esse potencial, no entanto, não determinou a atividade proteolítica em placas desses isolados nas condições avaliadas neste estudo. Do total, 65,63% dos psicrotróficos que continham o gene aprX foram confirmados como Pseudomonasspp., utilizando PCR gênero-específico. A análise filogenética do gene 16S rRNA dos outros psicrotróficos que foram produtores potenciais de AprX os identificou como Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1) e Acinetobacter schindleri (n=1) nas amostras inspecionadas e Psychrobacter sanguinis (n=1) e Leuconostoc mesenteroides (n=1) nas amostras não inspecionadas. As condições de produção do QMF dessas amostras, atendendo às determinações legais, não são suficientes para controlar a Pseudomonas e outros psicrotróficos relacionados à deterioração. Assim, medidas higiênicas mais rígidas são necessárias durante a produção formal deste tipo de queijo.

ABSTRACT: The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study. Of total, 65.63% of the psychrotrophs that contained aprX gene were confirmed as Pseudomonas spp., using genus-specific PCR. Phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of the other psychrotrophs that were potential producers of AprX identified them as Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1), and Acinetobacter schindleri (n=1) in the inspected samples and Psychrobacter sanguinis (n=1) and Leuconostoc mesenteroides (n=1) in the non-inspected samples. The production conditions of Brazilian MFC of these samples, while meeting the legal determinations, are not sufficient to control Pseudomonas and other spoilage-related psychrotrophs. Thus, stricter hygienic measures are required during the formal production of this type of cheese.

RESUMO: Pseudomonas é o principal gênero de micro-organismos Gram negativos isolados do leite, são psicrotróficos, formadores de biofilmes e produtores de enzimas deteriorantes termodúricas. O objetivo do presente trabalho foi quantificar Pseudomonas spp. no leite de cabras e vacas produzido no estado do Paraná, Brasil, avaliar a atividade deteriorante em temperatura mesofílica e psicrotrófica e identificar, em nível de espécie, os isolados com potencial de produção de metaloprotease alcalina (geneaprX). Foram utilizados métodos microbiológicos, bioquímicos e moleculares para isolamento, confirmação e identificação dos isolados. As contagens médias foram de 1,6 (±6,3) x 104 e 0,9 (±3) x 102 UFC/mL para as amostras de leite caprino e bovino, respectivamente. Dos isolados de Pseudomonas do leite de cabra (n=60), 91,7% demonstraram potencial proteolítico quando incubadas a 35°C/48h e 80% a 7°C/10dias e lipolíticos em 95% dos isolados incubados em mesofilia e em 78,3% dos incubados em temperatura de refrigeração. Dos isolados do leite bovino (n=20), foi verificada atividade proteolítica de 35% apenas quando incubadas a 35°C/48h e lipolítica em 25% dos isolados incubados a 7°C/10d e 35°C/48h. Foi observado que 83,3% e 25% dos isolados confirmados geneticamente como Pseudomonas spp. do leite caprino e bovino, respectivamente, apresentaram o potencial de produção de metaloprotease alcalina, sendo as espécies P. azotoformans, P. koreensis, P. gessardii, P. monteilii e P. lurida as mais frequentes no leite de cabras e P. aeruginosa a única identificada do leite de vacas.

ABSTRACT: Pseudomonas, the main genus of gram-negative microorganisms isolated from milk, is psychrotrophic, biofilm-forming, and thermo-resistant deteriorating enzyme producers. The aim of this study was to quantify Pseudomonas spp. in goat’s and cow’s milk produced in the Paraná state, Brazil, to evaluate the deteriorating activity of the isolates at mesophilic and psychrotrophic conditions and to identify, at the species level, the isolates with alkaline metalloprotease (aprX gene) production potential. Microbiological, biochemical and molecular methods were used for isolating, confirming and identifying of isolates. The mean counts were 1.6 (±6.3)x104 and 0.89(±3)x102 CFU/mL for goat and bovine milk samples, respectively, immediately after milking. Of the Pseudomonas colonies isolated from goat milk (n=60), 91.7% showed proteolytic potential when incubated at 35°C/48 h and 80% at 7°C/10 days, and lipolytic potential was observed in 95% of the isolates incubated in mesophilic and 78.3% at refrigeration conditions. From the isolates of bovine milk (n=20), 35% showed proteolytic activity only when incubated at 35°C/48 h, and lipolytic potential was observed in 25% of the isolates incubated at 7°C/10d and 35°C/48h. It was observed that 83.3% and 25% of the isolates genetically confirmed as Pseudomonas spp. of goat and bovine milk showed the potential for alkaline metalloprotease production, with the species P. azotoformans, P. koreensis, P. gessardii, P. monteilii and P. lurida being the most frequent in goat milk and P. aeruginosa the only species identified in cow milk.

Resumo As provas de estabilidade alcoólica e acidez Dornic ainda são amplamente utilizadas em diversos países, mensurando indiretamente a qualidade microbiológica do leite. Porém, outros fatores além da contagem de micro-organismos alteram essa relação, causando um efeito confundidor nesses testes de triagem. O objetivo deste estudo foi relacionar o pH, a contagem bacteriana total, a acidez Dornic e a porcentagem de lactose em leites estáveis e instáveis ao álcool. Foram analisadas 322 amostras de leite, sendo classificadas em ácidas, normais ou instáveis não ácidas, segundo os testes de resistência alcoólica e acidez titulável. Diferentemente de leites normais ou ácidos, não existe relação entre pH, CBT e acidez Dornic em amostras de leite que possuem instabilidade alcoólica sem acidez adquirida. Nesse tipo de leite, valores de pH entre 6,6 e 6,8 são acompanhados de contagens bacterianas mais baixas, de até 105 bac.mL-1, e porcentagens de lactose mais altas, de até 4,5%. Conforme a CBT aumenta, a porcentagem de lactose ou o pH tendem a diminuir, porém não necessariamente juntos. Esse comportamento faz com que o teste do álcool não seja um indicador confiável para a qualidade do leite, devendo ser aplicado sempre em conjunto com outras provas que auxiliem no diagnóstico de acidez bacteriana e/ou resistência térmica, como titulação do ácido lático, mensuração de pH e teste da fervura.

Abstract The alcoholic stability of milk is a current problem in many countries that still use the alcohol test to measure the microbiological quality of milk. Beyond microbiological acidity, many factors can also affect the alcoholic stability of milk, leading to a confounding effect in alcohol test and industrial losses. The present study aimed to evaluate the relationship between pH, bacterial count, Dornic acidity, lactose percentage and ethanol stability of milk. The samples comprised fresh raw milk from 322 dairy farms from Parana state. According to the results of the 72º ethanol test and the Dornic acidity test, the samples received the following classification: stable milk, acidic milk, or unstable milk to ethanol. There was no relationship among pH, Dornic acidity and microbiological count in samples of milk that were unstable to alcohol test. Unstable milk to ethanol has pH values ranging between 6.6-6.8 with low microbiological count (less than 105 cell.mL-1) and higher lactose percentages (up to 4.5%). As bacterial count increase, the lactose percent tends to decrease, but not necessarily together. This feature makes the alcohol test unreliable, and the use of other parameters is strongly recommended such as thermal stability, lactic acid titration, pH, and clot-on-boiling test.

RESUMO: Os esporos de bactérias estão amplamente difundidos no ambiente e podem contaminar o leite. Os esporos conferem resistência aos processos térmicos e sua germinação pode reduzir a vida útil do leite pasteurizado, uma vez que bactérias esporuladas aeróbias são muito frequentemente produtoras de proteases e lipases. O objetivo do presente trabalho foi identificar Paenibacillus sp. na microbiota deteriorante, oriunda da germinação de esporos no leite cru, e avaliar o seu potencial deteriorante. Vinte amostras de leite de propriedades distintas foram tratadas a 80ºC/12min e semeadas para isolamento de bactérias formadoras de esporos. Essas cepas foram repicadas em ágar leite e tributirina para verificação do seu potencial proteolítico e lipolítico, respectivamente. Foi realizada a amplificação e sequenciamento do gene 16S do rRNA para identificação das cepas por similaridade com as sequências de DNA depositadas no GenBank. Foram obtidos 137 isolados, dos quais 40 (29,2%) apresentaram atividade deteriorante do leite. Dessas, 3 (7,5%) cepas foram identificadas como Paenibacillus sp., todas lipolíticas. Paenibacillus sp. são considerados os principais responsáveis pela deterioração do leite pasteurizado de longa vida útil em outros países. Para o aumento da vida útil do leite pasteurizado brasileiro, é importante conhecer a microbiota esporulada, de forma a determinar sua origem e poder controlar a contaminação do leite tanto pelas formas vegetativas como por seus esporos.

ABSTRACT: Bacterial spores are widespread in the environment and can contaminate milk. Spores are resistant to thermal conditions and your germination reduces milk shelf-life because the aerobic bacteria that are sporulated produce proteases and lipases. The aim of this study was identify Paenibacillus sp., the spoilage microbiota, arising from the germination of spores in raw milk and your spoilage potential. Twenty different milk samples were treated at 80°C/12min and plated to isolate spore-forming bacteria. These strains were picked in milk agar and tributyrin agar for verification of their potential proteolytic and lipolytic activities, respectively. Amplification and sequencing of the 16S rRNA gene of the strains for identification by similarity to the DNA sequences deposited in GenBank was performed. One hundred and thirty-seven isolates were obtained, of which 40 (29.2%) showed spoilage activity for milk. Of these, three (7.5%) were identified as strains of Paenibacillus sp., and all were lipolytic. Paenibacillus sp. have been identified as primarily responsible for the spoilage of pasteurized milk with a long shelf-life in other countries. To increase the shelf-life of Brazilian pasteurized milk, it is important to identify the sporulated microbes to determine their origin and to control the contamination of milk by vegetative forms such as spores.

Fraudes no leite têm sido um problema recorrente no Brasil, tornando importante conhecer o efeito dos conservantes e neutralizantes utilizados com maior frequência, e a capacidade de detecção das provas oficiais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a sensibilidade analítica de provas descritas pela legislação, das provas por inibição microbiana inespecífica, o efeito dessas substâncias na inibição do crescimento microbiano e a persistência de resíduos detectáveis após 48 horas de refrigeração. Lotes de leite cru, livres de sustâncias adulterantes, foram aliquotados e adicionados de diferentes concentrações de formaldeído, peróxido de hidrogênio, hipoclorito de sódio, cloro, detergente alcalino clorado e hidróxido de sódio. A sensibilidade analítica das provas oficiais foi: 0,005% para formaldeído; 0,003% para peróxido de hidrogênio e 0,013% para hipoclorito. Cloro e detergente alcalino clorado não foram detectados pelas provas oficiais. A prova de neutralizantes não detectou hidróxido de sódio quando a acidez foi neutralizada com precisão. A prova da cultura de iogurte apresentou resultados próximos ao das provas oficiais para substâncias específicas. Concentrações de 0,05% formaldeído, 0,003% de peróxido de hidrogênio e 0,013% de hipoclorito de sódio reduziram significativamente (P<0,05) a microbiota do leite após 24 e 48 horas de refrigeração. O formaldeído e hipoclorito de sódio permaneceram detectável no leite após 48 e 24 horas de refrigeração, respectivamente e o peróxido de hidrogênio não foi detectável após 24 horas. As provas oficiais para a pesquisa de fraudes por adição de conservantes e neutralizantes ao leite apresentam limitações e podem não ser capazes de detectar adulterações no leite

Milk fraud has been a recurring problem in Brazil; thus, it is important to know the effect of most frequently used preservatives and neutralizing substances as well as the detection capability of official tests. The objective of this study was to evaluate the analytical sensitivity of legislation-described tests and nonspecific microbial inhibition tests, and to investigate the effect of such substances on microbial growth inhibition and the persistence of detectable residues after 24/48h of refrigeration. Batches of raw milk, free from any contaminant, were divided into aliquots and mixed with different concentrations of formaldehyde, hydrogen peroxide, sodium hypochlorite, chlorine, chlorinated alkaline detergent, or sodium hydroxide. The analytical sensitivity of the official tests was 0.005%, 0.003%, and 0.013% for formaldehyde, hydrogen peroxide, and hypochlorite, respectively. Chlorine and chlorinated alkaline detergent were not detected by regulatory tests. In the tests for neutralizing substances, sodium hydroxide could not be detected when acidity was accurately neutralized. The yogurt culture test gave results similar to those obtained by official tests for the detection of specific substances. Concentrations of 0.05% of formaldehyde, 0.003% of hydrogen peroxide and 0.013% of sodium hypochlorite significantly reduced (P<0.05) the microbial counts in milk after 24 and 48h refrigeration. Formaldehyde and sodium hypochlorite remained detectable in milk after 48 and 24h of refrigeration, respectively; while hydrogen peroxide could not be detected after 24h. Official tests for the detection of milk fraud by the addition of preservatives and neutralizing substances present limitations and may be ineffective in detecting milk adulteration

Esse trabalho teve como objetivo associar a ocorrência de distúrbios ácido-base com a estabilidade alcoólica do leite de animais a campo, bem como avaliar diferenças entre a composição mineral de leites estáveis e instáveis ao álcool. A amostragem compreendeu 96 vacas leiteiras, das quais o leite e o sangue correspondente de cada animal foram coletados. A composição mineral entre leites estáveis e instáveis ao álcool foi diferente e também pode estar relacionada aos distúrbios ácido-básicos. A quantidade média de fosfato foi menor no leite instável ao álcool, enquanto a de potássio foi maior. A frequência de amostras de leite com instabilidade alcoólica foi maior nas vacas com distúrbios ácido-básicos. A alcalose respiratória foi o desequilíbrio mais observado.

This study aimed to associate the occurrence of acid-base disorders with the alcoholic stability of milk from animals in the field, and to evaluate differences between the mineral composition of milk that was both stable and unstable in alcohol. The sample comprised 96 dairy cows, where the milk and blood of each corresponding animal was collected. The mineral composition of stable and unstable milk in alcohol was different and may be related to acid-base disturbances. The average amount of phosphate was lower in the milk that was unstable in alcohol, while potassium was greater. Frequency of the alcoholically unstable milk cases was higher in the cows with acid-base disturbances. Respiratory alkalosis was the disorder that was most observed.

Considerando os efeitos tóxicos, agudos e crônicos, para a saúde humana e animal, causados por resíduos de praguicidas em alimentos, este trabalho teve como objetivo a identificação e quantificação por cromatografia gasosa (CG) de resíduos de praguicidas organofosforados (OF) e carbamatos (CB) no leite cru, nos componentes da alimentação e água dos animais. Foram coletadas 30 amostras de leite cru da região agreste de Pernambuco e ao mesmo tempo eram coletadas amostras de alimentação e água ofertada aos animais em lactação de cada propriedade, totalizando 109 amostras de alimentação e 38 amostras de água. Das 30 amostras de leite analisadas, seis (20%) estavam contaminadas por resíduos de OF, cinco (16,7%) por resíduos de CB e uma amostra por ambos os praguicidas. Das 109 amostras de alimentação ofertada aos animais coletadas, 48 foram analisadas, com 15 amostras (31,25%) apresentando resíduos de OF, seis amostras (12,50%) contaminadas por resíduos de CB e uma amostra positiva para ambos os praguicidas. Das 16 amostras de água analizadas, seis (37,50%) estavam contaminadas por resíduos de OF e nenhuma apresentou resíduos de CB. Em quatro propriedades leiteiras os praguicidas detectados no leite foram compatíveis com o princípio ativo detectado na alimentação e/ou na água ofertada aos animais, sugerindo uma possível fonte de contaminação, mas não a única.

Considering acute and chronic toxicity effects on human and animal health caused by pesticide residues in food, this study aimed to analyze organophosphorate (OP) and carbamate (CB) in feedstuff and water destined for dairy cattle, as well as in the milk produced by these animals, through gas chromatography (GC). In the Agreste region of Pernambuco, Brazil, 30 raw milk samples and all components of the animals' diet were collected from several farms. Out of the 30 milk of milk analyzed, six (20%) were contaminated with OP, five (16.7%) with CB, and one sample with both pesticides. From 48 analyzed feed samples, 15 (31.25%) were contaminated with residues of OP, six (12.50%) with CB, and one sample was contaminated with both pesticides. Out of 16 water samples analyzed, six (37.50%) were contaminated with OP residues, but non with CB. In four dairy farms the pesticides detected in milk were compatible with the active principles found in water and/or foodstuff, suggesting them to be the source of contamination.

Altos níveis de contaminação microbiana, usualmente encontrados em alimentos de origem animal e nos ambientes de processamento, podem inibir a multiplicação de microrganismos patogênicos nesses produtos e interferir nos resultados das análises laboratoriais para o isolamento desses patógenos. Com o objetivo de verificar as possíveis interferências da microbiota autóctone encontrada na carne, produtos cárneos e plantas de processamento sobre a presença de Listeria spp., 443 amostras, coletadas em 11 estabelecimentos processadores, foram submetidas a análises microbiológicas para determinação dos níveis de contaminação por aeróbios mesófilos, coliformes totais e Escherichia coli e para verificação da presença de Listeria spp., de acordo com a metodologia proposta pelo USDA. Os resultados obtidos não mostraram uma interferência evidente da microbiota autóctone sobre Listeria spp., uma vez que esse gênero foi detectado mesmo nas amostras de carne e produtos cárneos e amostras ambientais e de superfície de equipamentos que apresentaram altos níveis de contaminação por aeróbios mesófilos e coliformes.

High levels of microbial contamination, commonly found in animal origin foods and food processing environments, are able to hinder the growth of pathogens in these products and interfere in the results of laboratory analyses for detection of these pathogens. With the aim of verifying the possible interference of the autochthonous microbiota encountered in meat and meat products and processing plants over the presence of Listeria spp., 443 samples, collected from 11 meat retail establishments, were submitted to microbiological analysis to determine the levels of mesophilic aerobes, total coliforms and Escherichia coli and the presence of Listeria spp., according to the methodology proposed by the USDA. The results did not show evident interference of the autochthonous microbiota over Listeria spp., once the genus was detected even in the meat, meat products and environmental samples with high levels of contamination by mesophilic aerobes and coliforms.

A qualidade microbiológica de carne e derivados é altamente influenciada pelas condições higiênicas durante sua produção e manipulação. Sem um controle higiênico adequado, o ambiente de abatedouros e açougues pode representar um importante ponto de contaminação. Com o objetivo de identificar os principais pontos de contaminação microbiológica na linha de processamento de carne, 443 amostras de equipamentos, instalações e produtos foram coletados em 11 estabelecimentos (1 abatedouro e 10 açougues) localizados no Estado do Paraná, Brasil. A qualidade microbiológica das amostras foi determinada utilizando-se placas Petrifilm™ para contagem de aeróbios mesófilos (AC), coliformes totais e Escherichia coli (EC) e bolores e leveduras (YM). Nos açougues os principais pontos de contaminação identificados, em ordem decrescente, foram caixas de aço inoxidável, amaciadores de carnes, moedores, facas, misturadores, embutideiras, caixas plásticas, pisos e ralos. No abatedouro, os principais pontos foram embutideiras, superfícies da plataforma de abate, pisos e ralos. Os produtos cárneos que apresentaram maiores níveis de contaminação foram lingüiças frescas e carne moída. Esse trabalho identificou os principais pontos de contaminação microbiológica na linha de processamento de carne, podendo direcionar profissionais responsáveis pelas condições higiênicas na obtenção desses produtos na determinação de procedimentos higiênicos adequados, para evitar ou reduzir a contaminação microbiológica em carne e seus derivados.

The microbiological quality of beef and meat products is strongly influenced by the conditions of hygiene prevailing during their production and handling. Without proper hygienic control, the environment in slaughterhouses and butcher shops can act as an important source of microbiological contamination. To identify the main points of microbiological contamination in the beef processing chain, 443 samples of equipment, installations and products were collected from 11 establishments (1 slaughterhouse and 10 butcher shops) located in the state of Paraná, Brazil. The microbiological quality of all the samples was evaluated using Petri dishes to obtain counts of mesophilic aerobes (AC), total coliforms, Escherichia coli (EC), yeasts and molds (YM). The main contamination points identified in butcher shops, in decreasing order, were stainless steel boxes, beef tenderizers, grinders, knives, mixers, sausage stuffers, plastic boxes, floors and drains. In the slaughterhouse, these points were sausage stuffers, platforms, floors and drains. The most severely contaminated products were fresh sausages and ground beef. This information about the main points of microbiological contamination in the beef processing chain is expected to aid professionals responsible for hygiene in similar establishments to set up proper hygienic procedures to prevent or reduce microbiological contamination of beef and meat products.

A presença de resíduos de antibióticos em leite pode ter efeitos adversos para a saúde pública e para a indústria de laticínios. O objetivo desse estudo foi verificar a presença de resíduos de antibióticos pelo kit Charm-test™ (principalmente beta-lactâmicos e sulfonamidas) em 210 amostras de leite cru, coletadas em quatro regiões produtoras de leite no Brasil: 47 em Viçosa - MG, 50 em Pelotas - RS, 63 em Londrina PR e 50 em Botucatu - SP. Resíduos de antibióticos foram detectados em 24 amostras (11,4%), sendo 13 (20,6%) da região de Londrina - PR, 4 (8,0%) da região de Botucatu - SP, 4 (8,5%) da região de Viçosa - MG, e 3 (6,0%) da região de Pelotas - RS. Apesar dos resultados obtidos serem considerados qualitativos, ficou evidente que resíduos de antibióticos podem ser considerados perigos químicos presentes no leite produzido no Brasil.

Antimicrobial residues present in milk can have many adverse effects for public health and for the dairy industry. The aim of this study is to evaluate the presence of antibiotics using the Charm-test™ kit (beta-lactams and sulfonamides, mainly) in 210 raw milk samples collected in four different milk-producing areas in Brazil: 47 in Viçosa - MG, 50 in Pelotas - RS, 63 in Londrina - PR and 50 in Botucatu - SP. Antibiotic residues were detected in 24 samples (11.4%). Among them, 13 (20.6%) were from Londrina - PR, 4 (8.0%) from Botucatu - SP, 4 (8.5%) from Viçosa - MG, and 3 (6.0%) from Pelotas - RS. Despite being qualitative results only, it is evident that antibiotics may be an important chemical hazard in milk produced in Brazil.

Organofosforados e carbamatos são compostos utilizados no controle de parasitas em animais e podem gerar resíduos nos produtos alimentícios derivados, representando um risco para o consumidor. O presente estudo objetivou pesquisar a presença de resíduos de organofosforados e carbamatos em leite cru produzido em quatro regiões leiteiras no Brasil e verificar se a presença desses compostos teria alguma relação com a ausência de Listeria monocytogenes e Salmonella spp., anteriormente observada nessas amostras. Entre 209 amostras analisadas, a presença de ao menos um desses compostos foi detectada em 196 (93,8%). Para a avaliação da sua interferência na detecção de L. monocytogenes e Salmonella spp., 28 amostras de leite positivas e negativas para esses compostos foram submetidas à fervura por 10 minutos e adicionadas desses patógenos, monitorando-se sua multiplicação durante armazenamento a 4 °C e a 25 °C. Não houve diferença significativa (p < 0,05) entre as taxas médias de multiplicação de L. monocytogenes e Salmonella spp. nas amostras de leite com diferentes resultados para resíduos de organofosforados ou carbamatos, indicando que esses patógenos não foram afetados pela presença desses resíduos. Entretanto, a alta freqüência de amostras de leite cru positivas para esses compostos é preocupante devido ao grande risco que representam para os consumidores, mesmo após o beneficiamento por tratamento térmico.

Chemical residues may be present in foods due to contamination in early stages of production, posing a potential risk to consumers. Organophosphates and carbamates are used in the control of parasites in animals and may generate residues in foods derived from these animals, like milk. This study aimed to survey the presence of these two pesticides in raw milk samples collected in four important milk-producing regions in Brazil and observe any possible relationship between presence of these compounds and the previously reported absence of Listeria monocytogenes e Salmonella spp. in the same milk samples. Organophosphates and/or carbamates were detected in 196 (93.8%) out of 209 samples. For evaluation of the interference of these products on detection of L. monocytogenes and Salmonella spp., 28 milk samples containing these pesticides were boiled for 10 minutes, added of the pathogens, and their multiplication was monitored during storage at 4 °C and 25 °C. No significant differences (p < 0.05) were observed in the growth of these pathogens in the milk samples when compared to negative controls, indicating absence of interference of the compounds on the detection of L. monocytogenes or Salmonella spp. However, the high frequency of raw milk samples containing organophosphates and/or carbamates poses a potential health problem to the consumers, even after heat treatment of the milk.

Evidências que o leite produzido e consumido no Brasil nem sempre apresenta a qualidade desejada têm gerado a discussão e desenvolvimento de novas políticas de incentivo à produção leiteira, resultando no desenvolvimento do Programa Nacional de Melhoria da Qualidade do Leite. Em complementação, em 2002 o Ministério da Agricultura publicou a Instrução Normativa 51 (IN51), com importantes inovações em relação à conservação e transporte do leite cru, além de estabelecimento de um padrão de qualidade para esse tipo de leite (10(6) UFC/mL), a ser implantado em diferentes prazos nas diferentes regiões do país, a partir de 2005. O presente trabalho teve como objetivo verificar se o leite cru produzido em quatro áreas de quatro estados produtores de leite no Brasil estaria, nesse momento, em condições de cumprir o estabelecido na IN 51, especialmente quanto ao atendimento dos padrões microbiológicos previstos. Amostras de leite cru, coletadas em 210 diferentes propriedades nas regiões de Viçosa, MG (47), Pelotas, RS (50), Londrina, PR (63) e Botucatu, SP (50), foram analisadas quanto aos níveis de contaminação por aeróbios mesófilos, utilizando o PetrifilmTM AC. Parcela significativa das amostras (48,6%) apresentaram contagens acima do determinado pela IN51, sendo 21,3% na região de Viçosa (MG), 56,0% na região de Pelotas (RS), 47,6% na região de Londrina (PR) e 68,0% na região de Botucatu (SP). Considerando as diferenças de cada região, foi possível observar a importância da refrigeração na conservação e transporte da produção, bem como da implantação de boas práticas e assistência técnica nas propriedades. Os resultados obtidos permitem concluir que a adequação às normas estabelecidas pela IN51 pode ser mais difícil em algumas regiões do que em outras, sendo fundamental a adoção da refrigeração na conservação e no transporte da produção, e de programas regionais de assistência a produtores leiteiros.

The need to improve quality and safety of milk produced and consumed in Brazil resulted in development of new governmental policies to support the Brazilian milk-producing sector. Among them, the most relevant is the PNMQL (National Program to Improve Milk Quality). In 2002, the Brazilian Ministry of Agriculture created the Instrução Normativa 51 (Normative Instruction 51, IN51), with important innovations related to maintenance and transport of raw milk, besides establishment of microbiological standards to be implemented in different periods of time, according to the producing region, starting in 2005. The present study aimed to trace if raw milk produced in four important milk-producing regions in the country would be capable to be in accordance to the microbiological standards established by IN51. Raw milk samples, collected in 210 different milk-producing farms, located in vicinities of Viçosa (Minas Gerais state), Pelotas (Rio Grande do Sul state), Londrina (Paraná state) and Botucatu (Sao Paulo state) were submitted to counts of mesophilic aerobes using PetrifilmTM AC plates. In a significant number of samples, the counts were above the standards, being 21.3% from Viçosa, 56.0% from Pelotas, 47.6% from Londrina and 68.0% from Botucatu. Taking into account the differences in milk-producing practices adopted in the four regions, the study evidenced the importance of cooling during maintenance and transport of raw milk. The relevance of adoption of good hygiene practices and access to technical support was also evidenced. The conclusion of the study is that the difficulties to achieve the standards established by IN51 may vary from region to region. Cooling of milk for maintenance and transport is fundamental, but regional programs to assist the milk producers are also needed.

A instabilidade do mercado de leite no Brasil força pequenos produtores de leite a procurar alternativas de comércio de sua produção, o que inclui a venda de leite cru para indivíduos que dão preferência a esse tipo de leite. Considerando a importância desse mercado e os conhecidos riscos à saúde que o consumo de leite cru pode representar, este estudo avaliou a qualidade microbiológica e a presença de Listeria monocytogenes, Salmonella spp., resíduos de cloretos, antimicrobianos e inseticidas (organofosforados e carbamatos) em leite cru produzido em 210 propriedades leiteiras localizadas em quatro importantes estados produtores de leite no Brasil (Paraná, São Paulo, Minas Gerais e Rio Grande do Sul). Em 66% das propriedades selecionadas, a ordenha era manual. Em 33% a ordenha era semi-automática (ordenha mecânica balde ao pé) e em apenas 1% o sistema de ordenha e armazenamento era totalmente mecânico (sistema fechado). Todas as amostras de leite cru foram negativas para L. monocytogenes, Salmonella spp e resíduos de cloretos. As contagens de aeróbios mesófilos foram superiores a 10(5) UFC/mL em 75,7% das amostras. Em 80,4%, as contagens de coliformes foram superiores a 10² UFC/mL. Escherichia coli foi detectada em 36,8% das amostras. Inseticidas e resíduos de antibióticos foram observados em 74,4% e 11,5% das amostras, respectivamente. Níveis inaceitáveis de microrganismos indicadores de higiene, inseticidas e resíduos de antibióticos foram considerados fatores de risco mais importantes que os dois patógenos estudados.

Fluctuations in the Brazilian milk market force small milk producers to find temporary trade alternatives, which include selling raw milk to people who prefer this type of milk rather than heat-processed milk. Considering the importance of these small milk producers to the market and the well-known health risks associated to consumption of raw milk, this study evaluated the microbiological quality and the presence of Listeria monocytogenes, Salmonella spp., chlorine, antimicrobials and insecticides (organophosphates and carbamates) in raw milk produced in 210 small and medium farms located in four important milk-producing Brazilian states (Paraná, São Paulo, Minas Gerais and Rio Grande do Sul). In 66% of the selected farms the milking was manual. In 33% of them, the milking was semi-automatic, and only 1% were equipped with fully automatic milking systems. All raw milk samples were negative for L. monocytogenes, Salmonella spp and chlorine. Mesophilic aerobes counts were higher than 10(5) CFU/ml in 75.7% of the samples. In 80.4%, coliforms were over 10² CFU/ml. Escherichia coli was detected in 36.8% of the samples. Insecticides and antimicrobial residues were observed in 74.4% and 11.5% of the samples, respectively. The presence of unacceptable levels of hygiene indicators, insecticides and antimicrobial residues were considered more important risk factors than the two pathogens.

Petrifilm™ EC e HS foram comparados ao método do Número Mais Provável (NMP) para determinar sua eficiência na enumeração de coliformes totais e E. coli em 145 amostras de água (76 de água in natura e 69 de água de abastecimento). Em água in natura, Petrifilm™ HS e EC mostraram boa correlação com o método de NMP. Em água clorada (< 20 col/100 mL e negativas) a concordância foi baixa. Para enumeração de E. coli, Petrifilm™ EC mostrou boa correlação com o método de NMP. Os resultados indicaram que Petrifilm™ EC e HS podem ser usados com segurança para enumeração de coliformes totais e E. coli em água, desde que as contagens esperadas sejam maiores que 20/100 mL.

Petrifilm™ EC and HS were compared to the MPN method to determine their efficacy to enumerate total coliforms and E. coli in 145 samples of water (76 water in natura, 69 drinking water). For water in natura, Petrifilm™ HS and EC showed good correlation with MPN method. In chlorinated water (< 20 col/100 mL and negatives) the agreement was low. For E.coli enumeration, Petrifilm™ EC showed a good correlation with MPN method. The results indicated that Petrifilm™ EC and HS are accurate to enumerate coliforms and E. coli in water when the expected counts are higher than 20/100 mL.